სიფრთხილის ზომები პოლიაკრილამიდის გელის ელექტროფორეზისთვის

· პოლიაკრილამიდიგელი უნდა იყოს აკრილამიდის მონომერის, პოლიმერიზაციის საწყისი მასალის, კატალიზატორის და მარილისა და ბუფერული ნარევის უფლება ერთად.

· აკრილამიდიდა BIS (N, N'- მეთილენის ორმაგი აკრილამიდი) არის მონომერული გელის მატრიცა.

· ამონიუმის პერსულფატი იწყება წებოვანი პოლიმერიზაციის პროცესი. წებოს ფორმულირება მოითხოვს წყალში მომზადებულ ამონიუმის პერსულფატის 10%-იან ხსნარს. ინფორმაციის უმეტესობა მიუთითებდა აქტიური გამოყენების აუცილებლობაზე. თუმცა, 10%-იანი ხსნარი შეიძლება განთავსდეს 4℃ ტემპერატურაზე რამდენიმე კვირის განმავლობაში აქტივობის მნიშვნელოვანი დაკარგვის გარეშე. შეადგინეთ 10 მლ-მდე და გადააგდეთ, როდესაც წებო არ დაგროვდება.

რჩევა: პროცენტიაკრილამიდიin sequencing წებო და ცილის წებო არ არის იგივე. თუ იყენებთ წინასწარ დამზადებულ აკრილამიდს: BIS ხსნარს, დარწმუნდით, რომ მიიღეთ სწორი ბოთლი.

· TEMED (N, N, N ', N' - ტეტრამეთილ ეთილენდიამინი) არის კატალიზატორი, ყავისფერ ბოთლში, მოთავსებულია მაცივარში. დაამატეთ წებოს ჩამოსხმის წინ.

· პოლიაკრილამიდის ელექტროფორეზისთვის გამოყენებული მინა ელექტროფორეზის დროს უნდა გაირეცხოს ყოველ ჯერზე და მის შემდეგ. ელექტროფორეზის შემდეგ გარეცხეთ რბილი ფუნჯით და ქსოვილით ცხელ საპნიან წყალში, ჩამოიბანეთ გამოხდილი წყლით და გააჩერეთ გასაშრობად.

· ტენიანობა და მტვერი შეიძლება გამოიწვიოს ღრუ პოლიმერით. ელექტროფორეზის წინ შუშის ფირფიტა გაწმინდეთ მინის საწმენდით და გაიწმინდეთ რბილი ფუნჯით. გარეცხეთ გამოხდილი წყლით და კარგად გააშრეთ ქაღალდის ხელსახოცით. 70% ეთანოლით გარეცხვა ქაღალდით გაწმენდამდე ხელს უწყობს გაწმენდას და აჩქარებს გაშრობას. თანმიმდევრულად დაამატეთ აკრილამიდის ნიმუშები: BIS, წყალი, ბუფერული ხსნარი, ამონიუმის პერსულფატი, TEMED. კარგად შეანჯღრიეთ და დაასხით მაშინვე.

პოლიმერიზაციამდე არ არის აუცილებელი პოლიაკრილამიდის გაზის გაჟონვა. (აკრილამიდს ათავსებდნენ ვაკუუმში ბუშტების მოსაშორებლად, რადგან ჟანგბადი აფერხებს პოლიმერიზაციას.)

ჰორიზონტალური წებოს წერტილის ნიმუშის რჩევები.

· ქვედა ყუთში ჩადეთ შავი ქაღალდის ნაჭერი, შავი ფონი, რომ გააკეთოთ ნიმუშის ხვრელი, რომ უფრო ნათლად დაინახოთ.
· წებოთი სავსე ბუფერი, მხოლოდ კოლოიდზე.
· თუ კიდეს აქვს შუქი, ჩართეთ განათება, ნება მიეცით სინათლე ანათებს კოლოიდური. შეიტანეთ ნიმუში პიპეტში.
· ავტომატური პიპეტინგის მოწყობილობის გამოყენებით.
· 10-200 მმ-ში 1 თხევადი მოძრავი წერტილის გამოყენება შესაძლებელია ნიმუშის უმეტეს წერტილში. ძალიან მცირე ნიმუშის ხვრელებისთვის (10μ1-ზე ნაკლები), უფრო მოსახერხებელია წებოს დარიგებისთვის გამოყენებული გრძელი პიპეტის თავი.

· პიპეტირება მხოლოდ ნიმუშში ჩაეფლო, ნელა მოძრავი სითხის ჩასუნთქვით. ნიმუში შეიძლება აღმოჩნდეს წებოვანი გლიცერინით და სწრაფმა ამოტუმბვამ შეიძლება ჰაერის ბუშტები შეაღწიოს პიპეტის თავში.

· ნიმუშები პიპეტინგის თავის ჩასუნთქვის შემდეგ, ნაზად გადააადგილებს სითხის თავს მილის კიდეზე ან ქაღალდის ამოწოვს წვეთების გარეთ. ფრთხილად იყავით, რომ ნიმუში არ შეწოვოთ.

მოათავსეთ ნიმუში ნიმუშის ხვრელში

· პიპეტირების ხელსაწყო მცირე წნევის შესანარჩუნებლად, ნიმუშებს ოდნავ გადააადგილეთ გადადინებული სითხის თავი.
· ბუფერში ჩასმული პიპეტინგის თავი, ოდნავ უფრო მაღალი ვიდრე ლაქების ნახვრეტები, ინარჩუნებს დადებით წნევას. პიპეტის წვერი შეიძლება ჩასვათ პატარა ხვრელში.
· ნელა და სტაბილურად გამოდის ნიმუშები. პიპეტის წვერი მოთავსებულია წერტილის ნიმუშის ხვრელის ზემოთ და ნიმუში ჩაიძირება ხვრელში. ნება მიეცით ნიმუში ჩაიძიროს, რათა შეავსოთ ნიმუშის ხვრელი, ნაცვლად ბიძგის.
თხევადი თავით ნიმუშის ბოლო წვეთიდან, სითხე გადავა მეორე ფეხიზე, ნელა აწიეთ სითხის გადაადგილება, ამოვა ბუფერიდან

როგორ გავაკეთოთ ვერტიკალური წებოს ნიმუში?

· ვერტიკალური წებოს წერტილის ნიმუშის ხვრელები წარმოიქმნება შუშის ორ ნაჭერს შორის. ძალიან თხელ წებოში, პიპეტის თავი ორ შუშის ფირფიტას შორისაც კი ვერ ჩაიდება. უყურეთ გლიცერინს! დაადეთ პიპეტის თავი ნიმუშის ხვრელზე და ნიმუში ჩაიძირება ხვრელში.
· წერტილი ნიმუში ადრე, დარწმუნდით, რომ დააყენოს ვერტიკალური წერტილი პოლიპროპილენის აცილის გელის ნიმუში ხვრელი გარეცხილი სუფთა. ჩამოიბანეთ არაპოლიმერიზებული აკრილამიდი და წყალი, რომელიც შეიძლება აღმოჩნდეს ნიმუშის ხვრელის ბოლოში. წყალს შეუძლია ნიმუშის ხვრელი მნიშვნელოვნად შეამციროს. გამოიყენეთ 25 მლ ან 50 მლ შპრიცი და 18 დიამეტრის ნემსი. ჩაასხით ელექტროფორეზის ბუფერში და ფრთხილად ჩამოიბანეთ ნიმუშის ხვრელი.
· შეიძლება რთული იყოს ნიმუშის ხვრელის დანახვა, მაგრამ ამავე დროს, დანარჩენი მარტივია. თუ ჭარბი ხვრელებია, ნიმუშის ბუფერი შეიძლება შემოწმდეს ბრომფენოლის ლურჯით.