პოლიაკრილამიდის გელის ელექტროფორეზის სიფრთხილის ზომები

· პოლიაკრილამიდიგელი უნდა შეიქმნას აკრილამიდის მონომერის, პოლიმერიზაციის საწყისი მასალის, კატალიზატორის და მარილისა და ბუფერული ნარევის ერთად შერევით.

· აკრილამიდიდა BIS (N, N'-მეთილენის ორმაგი აკრილამიდი) არის მონომერის ფორმის გელის მატრიცა.

· ამონიუმის პერსულფატით იწყება წებოვანი პოლიმერიზაციის პროცესი. წებოს ფორმულირებას სჭირდება წყალში მომზადებული 10%-იანი ამონიუმის პერსულფატის ხსნარი. ინფორმაციის უმეტესობა მიუთითებს აქტიური გამოყენების აუცილებლობაზე. თუმცა, 10%-იანი ხსნარის შენახვა შესაძლებელია 4°C ტემპერატურაზე რამდენიმე კვირის განმავლობაში აქტივობის მნიშვნელოვანი დაკარგვის გარეშე. შეავსეთ 10 მლ-მდე და გადააგდეთ, როდესაც წებო ვერ აგრეგირდება.

რჩევა: პროცენტული მაჩვენებელიაკრილამიდისეკვენირებისას წებო და ცილოვანი წებო ერთი და იგივე არ არის. თუ იყენებთ წინასწარ მომზადებულ აკრილამიდის:BIS ხსნარს, დარწმუნდით, რომ შესაბამისი ბოთლი გაქვთ.

· TEMED (N, N, N', N'- ტეტრამეთილ ეთილენდიამინი) არის კატალიზატორი, მოთავსებულია ყავისფერ ბოთლში, მოთავსებულია მაცივარში. დაამატეთ წებოს დასხმის წინ.

· ელექტროფორეზის დროს გამოყენებული პოლიაკრილამიდის მინა ყოველი გამოყენების წინ და შემდეგ უნდა გაირეცხოს. ელექტროფორეზის შემდეგ, რბილი ჯაგრისითა და ნაჭრით გარეცხეთ ცხელ საპნიან წყალში, ჩამოიბანეთ გამოხდილი წყლით და გააშრეთ.

· ღრუ პოლიმერმა შეიძლება გამოიწვიოს ტენიანობა და მტვერი. ელექტროფორეზის წინ, გაწმინდეთ მინის ფირფიტა მინის საწმენდით და გაწმინდეთ რბილი ფუნჯით. გარეცხეთ გამოხდილი წყლით და კარგად გააშრეთ ქაღალდის ხელსახოცით. ქაღალდით გაწმენდამდე 70%-იანი ეთანოლით ჩამობანა ხელს უწყობს გაწმენდას და გაშრობის დაჩქარებას. აკრილამიდის ნიმუშები თანმიმდევრობით დაამატეთ: BIS, წყალი, ბუფერული ხსნარი, ამონიუმის პერსულფატი, TEMED. კარგად შეანჯღრიეთ და მაშინვე დაასხით.

პოლიმერიზაციამდე პოლიაკრილამიდის დეგაზაცია საჭირო არ არის. (აკრილამიდი ადრე ვაკუუმში იდებოდა ბუშტების მოსაშორებლად, რადგან ჟანგბადი აფერხებს პოლიმერიზაციას.)

ჰორიზონტალური წებოვანი წერტილის ნიმუშის წვერები.

· ქვედა ყუთში მოათავსეთ შავი ქაღალდის ნაჭერი, შავ ფონზე გააკეთეთ ნიმუშის ნახვრეტი, რათა უფრო მკაფიოდ დაინახოთ.
· წებოს ავზით სავსე ბუფერი, კოლოიდის ზემოთ.
· თუ კიდეს ნათურა აქვს, ჩართეთ ნათურა, მიეცით კოლოიდური სინათლე. ამოიღეთ ნიმუში პიპეტში.
· ავტომატური პიპეტირების მოწყობილობის გამოყენებით.
· 10-200 mu 1 სითხის მოძრავი წერტილის გამოყენება შესაძლებელია ნიმუშზე არსებული წერტილების უმეტესობაში. ძალიან პატარა ნიმუშის ნახვრეტებისთვის (10μ1-ზე ნაკლები), სეკვენირებისთვის გამოყენებული გრძელი პიპეტის თავი უფრო მოსახერხებელია.

· ნიმუშში ახლად ჩაძირული პიპეტით, ნელა მოძრავი სითხის შესუნთქვით. ნიმუში შეიძლება წებოვანი იყოს გლიცერინის გამო და სწრაფმა ამოტუმბვამ შეიძლება ჰაერის ბუშტები შეიტანოს პიპეტის თავში.

· პიპეტირების თავის შესუნთქვის შემდეგ, ნიმუშები ფრთხილად გადაადგილდება სითხის თავს მილის კიდეზე ან ხელსახოცით შეიწოვს სითხის თავს წვეთების გარეთ. ფრთხილად იყავით, რომ ნიმუში არ შეიწოვოს.

მოათავსეთ ნიმუში ნიმუშის ხვრელში

· პიპეტირების მოწყობილობა მცირე წნევის შესანარჩუნებლად, ნიმუშების ოდნავ ამოძრავებისთვის გადმოდინებული სითხის თავი.
· ბუფერში ჩასმული პიპეტის თავი, წერტილოვან ხვრელებზე ოდნავ მაღლა, ინარჩუნებს დადებით წნევას. პიპეტის წვერი შეიძლება ჩასვათ პატარა ხვრელში.
· ნელა და თანაბრად გამოიღეთ ნიმუშები. პიპეტის წვერი მოთავსებულია ნიმუშის წვეტიანი ხვრელის ზემოთ და ნიმუში ჩაიძირება ხვრელში. ჩაძირვის ნაცვლად, მიეცით ნიმუშს საშუალება ჩაიძიროს ნიმუშის ხვრელის შესავსებად.
· როგორც კი ნიმუშის ბოლო წვეთი სითხის თავთან ერთად ჩაედინება, სითხე მეორე ფეხისკენ გადავა, ნელა ასწიეთ სითხე, გადაიტანეთ ბუფერიდან

როგორ გავაკეთოთ ვერტიკალური წებოს ნიმუშის აღება?

· ვერტიკალური წებოვანი წერტილის ნიმუშის ხვრელები წარმოიქმნება ორ შუშის ნაჭერს შორის. ძალიან თხელი წებოს შემთხვევაში, პიპეტის თავი ორ შუშის ფირფიტას შორისაც კი არ შეიძლება ჩაედოთ. ყურადღება მიაქციეთ გლიცერინს! პიპეტის თავი ნიმუშის ხვრელზე დაადეთ და ნიმუში ხვრელში ჩაიძირება.
· ნიმუშის აღებამდე, დარწმუნდით, რომ ვერტიკალურ წერტილში პოლიპროპილენის აცილის გელის შემცველი ნიმუშის ხვრელი კარგად გაირეცხება. ჩამოიბანეთ არაპოლიმერიზებული აკრილამიდი და წყალი, რომელიც შეიძლება ნიმუშის ხვრელის ძირში გაჩნდეს. წყალმა შეიძლება მნიშვნელოვნად დააპატარაოს ნიმუშის ხვრელი. გამოიყენეთ 25 მლ ან 50 მლ შპრიცი და 18 კალიბრის ნემსი. ჩაასხით ელექტროფორეზის ბუფერი და ფრთხილად გამორეცხეთ ნიმუშის ხვრელი.
· ნიმუშის ნახვრეტის დანახვა შეიძლება რთული იყოს, მაგრამ ამავდროულად, დანარჩენი მარტივია. თუ ზედმეტი ნახვრეტებია, ნიმუშის ბუფერის შემოწმება შესაძლებელია ბრომოფენოლის ლურჯით.