სიფრთხილის ზომები პოლიაკრილამიდის გელის ელექტროფორეზისთვის

· პოლიაკრილამიდიგელი უნდა აკრილამიდის მონომერით, პოლიმერიზაციის საწყისი მასალა, კატალიზატორი და მარილისა და ბუფერული ნარევის მარჯვენა ერთად.

· აკრილამიდიდა bis (n, n '- მეთილენის ორმაგი აკრილამიდი) არის მონომერული ფორმა გელის მატრიცა.

· ამონიუმის persulfate დაიწყეთ წებოვანი პოლიმერიზაციის პროცესი. წებოს ფორმულირება მოითხოვს 10% ამონიუმის persulfate ხსნარს, რომელიც მომზადებულია წყალში. ინფორმაციის უმეტესობამ მიუთითა აქტიური გამოყენების საჭიროება. ამასთან, 10% -იანი ხსნარი შეიძლება განთავსდეს 4 ℃ –ზე რამდენიმე კვირის განმავლობაში, საქმიანობის მნიშვნელოვანი დაკარგვის გარეშე. შეადგინეთ 10 მლ და გაათავისუფლეთ, როდესაც წებო ვერ ახერხებს აგრეგატს.

რჩევა: პროცენტული მაჩვენებელიაკრილამიდითანმიმდევრობის წებო და ცილის წებო არ არის იგივე. Premade Acrylamide- ის გამოყენებისას: BIS Solution, დარწმუნდით, რომ მიიღეთ სწორი ბოთლი.

· Temed (n, n, n ', n'- ტეტრამეთილ ეთილენენდიამინი) არის კატალიზატორი, ყავისფერ ბოთლში, რომელიც მოთავსებულია მაცივარში. დაამატეთ წებოთი.

· პოლიაკრილამიდის ელექტროფორეზი გამოყენებული მინის ელექტროფორეზში უნდა დაიბანოთ ყოველ ჯერზე და მის შემდეგ. ელექტროფორეზის შემდეგ, გარეცხეთ რბილი ფუნჯითა და ქსოვილით ცხელი საპნის წყალში, ჩამოიბანეთ გამოხდილი წყლით და გაშრეს.

· ტენიანობა და მტვერი შეიძლება გამოიწვიოს ღრუ პოლიმერით. ელექტროფორეზის წინ, გაასუფთავეთ შუშის ფირფიტა შუშის გამწმენდით და გაწურეთ რბილი ფუნჯით. დაიბანეთ გამოხდილი წყლით და კარგად გაშრეს ქაღალდის წაშლით. 70% ეთანოლით ჩამოიბანეთ ქაღალდის წაშლამდე ხელს უწყობს გაშრობის გაწმენდას და დაჩქარებას. თანმიმდევრულად დაამატეთ აკრილამიდის ნიმუშები: ბის, წყალი, ბუფერული ხსნარი, ამონიუმის persulfate, temed. კარგად შეანჯღრიეთ და დაუყოვნებლივ დაასხით.

არ არის აუცილებელი პოლიმერიზაციამდე პოლიაკრილამიდი. (აკრილამიდი, რომელიც ვაკუუმში იყო მოთავსებული, ბუშტების მოსაშორებლად, რადგან ჟანგბადი აფერხებს პოლიმერიზაციას.)

ჰორიზონტალური წებოს წერტილის ნიმუშის რჩევები.

· განათავსეთ შავი ქაღალდის ნაჭერი ქვედა ყუთში, შავი ფონი, რომ გააკეთოთ ნიმუშის ხვრელი, რომ უფრო ნათლად ნახოთ.
· წებოს სატანკო შევსებული ბუფერი, კოლოიდზე.
· თუ ზღვარს აქვს შუქი, ჩართეთ განათება, მოდით, შუქი ანათებს კოლოიდს. შეადგინეთ ნიმუში პიპეტში.
· ავტომატური პიპეტინგის მოწყობილობის გამოყენებით.
· 10-200 მუ 1 თხევადი მოძრავი წერტილი შეიძლება გამოყენებულ იქნას ნიმუშის წერტილების უმეტესობაში. ძალიან მცირე ნიმუშის ხვრელებისთვის (10μ1- ზე ნაკლები), გრძელი პიპეტის თავი, რომელიც გამოიყენება თანმიმდევრობის წებოსთვის, უფრო მოსახერხებელია.

· პიპეტინგი უბრალოდ ჩაეფლო ნიმუშში, ნელა მოძრაობს სითხის ნელა. ნიმუში შეიძლება ჩანდეს გლიცერინით წებოვანი, ხოლო სწრაფმა ტუმბოსმა შეიძლება გამოიწვიოს ჰაერის ბუშტები პიპეტის თავში.

· ნიმუშები მილსადენის თავით ინჰალაციის შემდეგ, სითხის თავი ნაზად გადააქვთ მილის კიდეზე ან წაშლის ქაღალდის წოვს თხევადი თავი წვეთების გარეთ. ფრთხილად იყავით, რომ არ შეამციროთ ნიმუში.

მოათავსეთ ნიმუში ნიმუშის ხვრელში

· პიპეტინგის მოწყობილობა მცირე წნევის შესანარჩუნებლად, გააკეთეთ ნიმუშები ოდნავ გადაიტანეთ თხევადი თავით.
· ბუფერში ჩასმული მილსადენის თავი, ოდნავ აღემატება ადგილზე ხვრელებს, შეინარჩუნებს დადებით წნევას. პიპეტის წვერი შეიძლება ჩასვათ პატარა ხვრელში.
· ნელა და სტაბილურად გამოვიდა ნიმუშები. პიპეტის წვერი მოთავსებულია წერტილის ნიმუშის ხვრელის ზემოთ, ხოლო ნიმუში ჩაიძირება ხვრელში. მოდით, ნიმუშის ჩაძირვა შეავსოს ნიმუშის ხვრელი, ნაცვლად იმისა, რომ აიძულა.
· მას შემდეგ, რაც ნიმუშის ბოლო წვეთი თხევადი თავით, თხევადი გადავა მეორე ფეხიზე, ნელა აამაღლებს თხევად მოძრაობას, გადაადგილდით ბუფერულიდან

როგორ გავაკეთოთ ვერტიკალური წებოს შერჩევა?

· ვერტიკალური წებოს წერტილის ნიმუშის ხვრელები, რომლებიც წარმოიქმნება შუშის ორ ნაჭერს შორის. ძალიან თხელი წებოთი, პიპეტის თავი ვერც კი ჩასვამთ ორ შუშის ფირფიტას შორის. უყურეთ გლიცერინს! პიპეტის თავი განათავსეთ ნიმუშის ხვრელზე და ნიმუში ჩაიძირება ხვრელში.
· წერტილის ნიმუში ადრე, დარწმუნდით, რომ განათავსეთ პოლიპროპილენის აცილის გელის ნიმუშის ხვრელის ვერტიკალური წერტილი სუფთა. გარეცხეთ არაპოლიმერიზებული აკრილამიდი და წყალი, რომელიც შეიძლება გამოჩნდეს ნიმუშის ხვრელის ძირში. წყალს შეუძლია ნიმუშის ხვრელი მნიშვნელოვნად მცირე ზომის გახადოს. გამოიყენეთ 25ml ან 50ml შპრიცი და 18-კაციანი ნემსი. დაასხით ელექტროფორეზის ბუფერში და ფრთხილად ააფეთქეთ ნიმუშის ხვრელი.
· შეიძლება რთული იყოს ნიმუშის ხვრელის ნახვა, მაგრამ ამავე დროს, დანარჩენი მარტივია. თუ ზედმეტი ხვრელები არსებობს, ნიმუშის ბუფერის ტესტირება შესაძლებელია ბრომოფენოლის ლურჯით.